Lokalne odnowienie dystrofiny za pomocą antysensownego oligonukleotydu PRO051 ad 8

Ponieważ takie porównanie na podstawie całkowitego białka nie koryguje różnych ilości zwłóknienia i tkanki tłuszczowej u pacjentów z dystrofią mięśniową Duchenne a, określiliśmy również ilościowo sygnał fluorescencji dystrofiny (Figura 4A i 4B) w stosunku do sygnału z podobnie położonej lamininy .2. w każdej sekcji według analizy ImageJ. Gdy stosunek dystrofiny do lamininy .2 był ustawiony na 100 dla sekcji kontrolnej, Pacjenci 1, 2, 3 i 4 mieli stosunki odpowiednio 33, 35, 17 i 25 (Figura 4D). Dyskusja
Nasze badanie wykazało, że miejscowe wstrzyknięcie domięśniowe PRO051, antysensownego oligorybonukleotydu 2OMePS komplementarnego do sekwencji 20-nukleotydowej w eksonie 51, wywołało pomijanie egzonu-51, skorygowało ramkę odczytu i tym samym wprowadziło dystrofinę w mięśniu u wszystkich czterech pacjentów z muskulaturą Duchenne a. dystrofia, która otrzymała terapię. Włókna dystrofiny-dodatnie znaleziono we wszystkich próbkach biopsyjnych pacjentów, co wskazuje na rozproszenie związku w miejscu wstrzyknięcia. Ponieważ nie stosowano żadnej zaróbki zwiększającej dostarczanie, wychwyt PRO051 nie wydawał się być głównym potencjalnie czynnikiem ograniczającym. Nie możemy wykluczyć, że zwiększona przepuszczalność błony włókien dystroficznych miała korzystny wpływ. Pacjenci wytwarzali poziomy dystrofiny, które stanowiły od 3 do 12% poziomu w zdrowym mięśniu kontrolnym, jak wykazano w analizie Western blot białka całkowitego. Ponieważ obecność zwłóknienia i tłuszczu może prowadzić do pewnego niedoszacowania dystrofiny w ekstraktach białkowych ogółem, ustaliliśmy stosunek dystrofiny do lamininy .2 w przekrojach, które mieściły się w zakresie od 17 do 35, w porównaniu ze 100 w mięśniu kontrolnym. Działanie PRO051 przywracające dystrofinę było ograniczone do leczonego obszaru i nie zaobserwowano poprawy siły całego mięśnia. Przyszłe leczenie systemowe wymagać będzie wielokrotnego podawania w celu zwiększenia i utrzymania ekspresji dystrofiny na wyższym poziomie oraz uzyskania skuteczności klinicznej.
Z powodu przepisów dotyczących etyki lekarskiej dotyczących interwencji u nieletnich, nie mogliśmy uzyskać próbki z biopsji od przeciwległych mięśni pacjentów, które nie zostały wstrzyknięte. Jednak pacjenci wykazywali mniej niż 1% włókien rewersyjnych w oryginalnych próbkach biopsji diagnostycznej uzyskanych 5 do 9 lat przed rozpoczęciem badania (Tabela i Figura 2B). Uważamy za bardzo prawdopodobne, że obserwowane efekty były związane z charakterem i sekwencją odczynnika PRO051, a nie z wyraźnym wzrostem liczby powtórzeń włókien. Rzeczywiście, pojedyncze, możliwie reaktywne włókno, które miało zwiększony sygnał dystrofiny, obserwowano zarówno u Pacjenta 2, jak i Pacjenta 3 (Figura 4B).
Podsumowując, nasze badanie wykazało, że miejscowe podawanie PRO051 mięśniom u czterech pacjentów z dystrofią mięśniową Duchenne a przywróciło dystrofinę do poziomu w zakresie od 3 do 12% lub od 17 do 35%, w zależności od ilościowego określenia w stosunku do całkowitej zawartości białka lub miofibra. Zgodnie z wyraźnie zlokalizowanym charakterem leczenia nie zaobserwowano poprawy czynnościowej. Konsekwentnie gorszy wynik u Pacjenta 3, który miał najbardziej zaawansowaną chorobę, sugeruje znaczenie prowadzenia badań klinicznych u pacjentów w stosunkowo młodym wieku, gdy stosunkowo mało tkanki mięśniowej zastąpiono włóknistą i tkanką tłuszczową. Nasze odkrycia świadczą o tym, że omijanie egzonu za pośrednictwem antysensownego może być potencjalnym podejściem do przywracania syntezy dystrofiny w mięśniach pacjentów z dystrofią mięśniową Duchenne a.
[patrz też: dobry gastrolog białystok, olej ryżowy na włosy, gastromed garwolin ]